DNAAssemblyMixPLUS产品简介：
基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据DNA片段与线性化载体末端的15~25nt同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点，载体自连背景极低，是一种简单、快速、高效的DNA定向克隆技术。
DNAAssemblyMixPLUS无缝克隆试剂盒好快仅需5分钟即可完成单片段重组，且阳性率高于95%。Mix中添加的辅助因子，有效提高克隆阳性率；经优化的反应体系，能够一定程度上耐受未纯化PCR产物中含有的杂质。升级版的无缝克隆试剂盒具有更高的阳性率、更好的兼容性。
使用简单——兼容PCR与酶切体系，省去繁琐的纯化步骤
超高效率——可以稳定支持5-6片段在同一克隆体系
稳定可靠——37℃放置一周或冻融30次，无明显下降
2、线性化克隆载体制备
选择合适的克隆位点，对载体进行线性化，载体的线性化可以通过酶切或反向PCR扩增完成。
①酶切制备
推荐使用LabFD™快速内切酶进行双酶切，使载体线性化wan全，以降低转化背景(假阳性克隆)；若使用单酶切进行线性化，可以适当延长酶切时间以减少环状质粒残留。
注1：经双酶切进行线性化的载体无需去磷酸化，经单酶切则需要去磷酸化；
注2：酶切完成后，应将快速内切酶失活或对目的产物纯化后再用于重组反应。
②反向PCR扩增制备
为减少扩增突变的引入，推荐使用高保真PCRMix进行扩增。推荐使用预线性化质粒作为模板，以减少环状质粒模板残留对克隆阳性率的影响。
3、插入片段PCR引物设计
PCR引物的5'端必须包含与其相邻片段（插入片段或载体）末端同源的15~25nt（推荐18nt）序列。假如载体为粘性末端，且3'端突出，则引物设计必须包含突出部分；若5'端突出，则引物设计可以包含突出部分，也可以不包含。
14、gibson克隆
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https://www.chem17.com/st534943/product_37827010.html